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  • 第159期 開(kāi)工奉上東曹TSKgel色譜柱清洗再生方法 及注意事項

    2023年03月06日來(lái)源:管理員
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    ?TSKgel SW型尺寸排阻色譜柱

    一、SWXL 系列色譜柱初次使用注意事項

    1. 流動(dòng)相現配現用,配好后使用0.45μm的水相濾膜過(guò)了后再超聲脫氣。

    2. 樣品一定要完全溶解后,再使用0.45μm的針式濾頭過(guò)濾后再進(jìn)樣。

    3. G2000SWXL/G3000SWXL/G4000SWXL 的耐受壓力是7.0MPa,所以要在儀器上設定限壓保護7.0MPa。

    4. 初次拿到柱子后,參照柱盒中的Inspection data的方法評估柱效后再使用。

    5. 柱子一定要常溫保存。不能放在冰箱冷藏。

    6. 當柱子峰形變寬了或者是壓力升高了,就需要清洗柱子了。

    7. 對于使用尿素或者含SDS的流動(dòng)相的柱子,最好專(zhuān)柱專(zhuān)用,表面活性劑對柱床有不可逆的改性作用。

    8. 最好使用保護柱,這樣可以有效延長(cháng)分析柱的使用壽命。

    、色譜柱的清洗步驟

    隨著(zhù)使用時(shí)間或進(jìn)樣次數的增加,出現柱效下降無(wú)法達到分離要求,或伴有峰型拖尾、分叉等情況時(shí),就需要清洗色譜柱。建議清洗過(guò)程中將色譜柱與檢測器斷開(kāi)連接,防止流通池污染。

    1.?反向連接色譜,并以最大流速的1/2運行色譜柱 。

    2.??使用5倍柱體積 (CV) pH3.0 0.5 mol/LNa2SO4水溶液沖洗色譜柱。

    3.?使用5 CV Milli-Q或去離子水沖洗色譜柱。

    4.?使用5 CV 20%乙腈清洗色譜柱。

    5.?使用5 CV Milli-Q或去離子水沖洗色譜柱。

    6.?再正向連接色譜柱,并以樣品分析時(shí)的流速使用至少10 CV的流動(dòng)相來(lái)平衡色譜柱。

    ?請注意:應逐漸提高流速,以免損壞色譜柱。

    、色譜柱的保存

    ? 短期保存(2-3天后還要使用)

    在使用的流動(dòng)相條件下,擰好堵頭后,常溫保存。

    ? 長(cháng)期保存(超過(guò)3天以上不用)

    1.?0.1 mol/L Na2SO4+0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液+0.05% NaN3保存(官方推薦)。

    2.?如果不能使用NaN3,請用適當的流動(dòng)相或水來(lái)保存色譜柱,建議頻繁用新配置的溶液替換色譜柱內的溶劑。

    3.?0.1 mol/L Na2SO4+0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液+0.1% Proclin200保存。

    4.??不要使用含有機溶劑的溶液保存色譜柱。

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    ?TSKgel PW型尺寸排阻色譜柱

    一、PWXL 系列色譜柱初次使用注意事項

    1. 流動(dòng)相現配現用,配好后使用0.45μm的水相濾膜過(guò)了后再超聲脫氣。

    2. 樣品一定要完全溶解后,再使用0.45μm的針式濾頭過(guò)濾后再進(jìn)樣。

    3. G2500PWXL/G3000PWXL的耐受壓力是4.0MPa,G4000PWXL /G5000PWXL/G6000PWXL的耐受壓力是2.0MPa,所以要在儀器上設定限壓保護。

    4. 初次拿到柱子后,參照柱盒中的Inspection data的方法評估柱效后再使用。

    5. 柱子一定要常溫保存。不能放在冰箱冷藏。

    6. 當柱子峰形變寬了或者是壓力升高了,就需要清洗柱子了。

    7. 對于使用尿素或者含SDS的流動(dòng)相的柱子,最好專(zhuān)柱專(zhuān)用,表面活性劑對柱床有不可逆的改性作用。

    8. 最好使用保護柱,這樣可以有效延長(cháng)分析柱的使用壽命。

    、色譜柱的清洗步驟

    1、去除離子性雜質(zhì):對于陽(yáng)離子性吸附物質(zhì),可以通過(guò)提高鹽濃度進(jìn)行過(guò)柱清洗。

    2、去除疏水性雜質(zhì):對于疏水性吸附物質(zhì),可以通過(guò)提高有機溶劑的濃度進(jìn)行過(guò)柱清洗。

    3、去除難溶性蛋白質(zhì):使用含尿素的溶液清洗。

    請根據樣品性質(zhì),從方法12中選擇適當的清洗方法。如果色譜柱性能仍不能恢復,可考慮采用方法3。但需注意尿素可能會(huì )殘留在色譜柱上。

    請注意:應逐漸提高流速,以免損壞色譜柱。

    、色譜柱的保存

    1、短期保存(2-3天后還要使用)

    如果數天內不會(huì )使用色譜柱,請從設備上取下色譜柱。如果溶劑中不含任何腐蝕性的離子,請使用保護塞封住色譜柱的末端。如果溶劑中含有腐蝕性離子,如鹵素,請在保存之前,使用純水清洗色譜柱。

    2、長(cháng)期保存(超過(guò)3天以上不用)

    如果長(cháng)時(shí)間不使用色譜柱,請使用純水替換溶劑。然后請從設備上取下色譜柱,并使用保護塞封住色譜柱的末端。長(cháng)期保存(例如,超過(guò) 3 個(gè)月)時(shí),請使用含有 0.05 %疊氮化鈉的水溶液保存。

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    ?TSKgel 蛋白分離用色譜柱

    TSKgel親水性聚合物基質(zhì)的蛋白分離用色譜柱,包括SuperQ-5PW,?DEAE-5PW,SP-5PW,CM-5PW,DEAE-NPR,SP-NPR,BioAssist Q/S這幾個(gè)型號的離子交換色譜柱,還有疏水、親和等其他多種類(lèi)型的柱子。

    一、色譜柱的清洗

    1.?先使用0.10.2 mol/L氫氧化鈉水溶液或2040%的醋酸水溶液進(jìn)樣清洗?(100 μL,35) 即可沖掉色譜柱上吸附的雜質(zhì)。

    2.?使用20%~40%乙酸清洗水溶液進(jìn)樣清洗?(100 μL,35) 即可沖掉色譜柱上吸附的雜質(zhì)。

    如果采用該方法清洗后,色譜柱性能仍無(wú)法恢復,再考慮以下兩種方法。

    3.?去除疏水性雜質(zhì):在清洗液中添加10-20 %的甲醇、乙腈等有機溶劑后過(guò)柱清洗。

    4.?去除難溶性蛋白:在清洗液中添加6-8 mol/L的尿素或0.2-0.3 %的中性表面活性劑 (Triton、Tween) 后過(guò)柱清洗。但需注意尿素及界面活性劑可能在柱中殘留。

    二、色譜柱的保存

    1.?請在色譜柱中注入保存溶液并擰緊保護塞后室溫保存,防止填料干燥。

    2.?保存溶液:參考出廠(chǎng)檢測報告。

    3.?色譜柱進(jìn)口或出口干燥、或者洗脫溶液的鹽析,會(huì )導致色譜柱堵塞。如果將色譜柱保存在 0以下,溶劑可能會(huì )凝固,導致色譜柱性能降低。


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