?凝血因子是血漿與組織中直接參與凝血的物質(zhì)的統稱(chēng)。其中已按國際命名法，用羅馬數字按發(fā)現的次序編號的凝固因子有12種（原13種，VI其實(shí)是活化后的第五因子而被取消）：凝血因子I，II，III，IV，V，VII，VIII，IX，X，XI，XII，XIII。此外，還有前激肽釋放酶、激肽釋放酶，以及來(lái)自血小板的磷脂等。因子XIII以后被發(fā)現的凝血因子，經(jīng)過(guò)多年驗證，認為對于凝血功能，無(wú)決定性的影響，不再列入凝血因子的編號。因子VI事實(shí)上是活化的第五因子，已經(jīng)取消因子VI的命名。除了Ca2+和磷脂外，其余已知因子都是蛋白質(zhì)，多具有酶的特性，在血液中處于無(wú)活性狀態(tài)，以保持血液的液體性。只有被激活后才有凝血作用。通常于因子名稱(chēng)后加“a”，以示其為活化狀態(tài)，如II→IIa。多數凝血因子在肝臟合成且需維生素K參與。九因子（凝血因子IX）的學(xué)名為凝血酶原復合物全名凍干人凝血酶原復合物，俗稱(chēng)九因子，為人體血漿制品，主要用于治療乙型血友病。
離子交換色譜（IEC）因吸附量較大，被廣泛應用于血漿蛋白的粗純工藝。但是離子交換色譜容易受到樣品中鹽濃度的影響，如果樣品溶液中含鹽，則除了過(guò)濾以外，還需要進(jìn)行脫鹽、透析等前處理。但是，近幾年市面上出現了一種不易受到鹽濃度影響的耐鹽型（salt-tolerant）離子交換填料，可以作為一種混合模式填料用于這類(lèi)樣品的純化。
最近發(fā)表在期刊《Biotechnology Journal》上的一篇文獻中，研究人員使用了東曹的耐鹽型陽(yáng)離子交換填料TOYOPEARL Sulfate-650F，從凝血酶原復合物濃縮液（PCC）中有效純化凝血因子IX（Factor?IX，九因子）。
M. Begi? et al., Salt-tolerant cation-exchanger containing sulfate groups as a viable alternative for mixed-mode type and heparin-base affinity resin, Biotechnol. J., 2021; 2100100, CC BY NC ND,?https://doi.org/10.1002/biot.202100100
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一、TOYOPEARL Sulfate-650F的簡(jiǎn)介
1. 帶有硫酸根官能團的陽(yáng)離子交換填料
??官能團為硫酸根(SO4-) ,與S-、SP-和CM-等類(lèi)型相似，同為陽(yáng)離子交換填料。
??對抗體等蛋白有很高的吸附載量。
2. 可有效去除抗體中的多聚體
??相較于其他陽(yáng)離子交換填料，對多聚體有著(zhù)更高的分離效果。
??在pH低于5.0、并含有0.15 mol/L的NaCl緩沖液中仍然可以結合抗體，具有耐鹽性。
??可作為Protein A層析的后續純化步驟。
3. 有類(lèi)似于肝素親和填料的分離純化效果
??可以應用于AT-III和其他相關(guān)蛋白的分離純化。
??有望應用于病毒和疫苗的分離純化。
4. 適用的緩沖液pH范圍
??一般可以用于pH?4-12的緩沖液中。
??可以用pH?3-13的清洗液進(jìn)行短時(shí)間的CIP處理。
二、TOYOPEARL Sulfate-650F的基本參數
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性能指標 | 規格參數 |
蛋白吸附載量 靜態(tài) 動(dòng)態(tài) | ? ≥114g/L(human IgG) ≥95g/L |
離子交換容量 | ≥0.53eq/L |
粒徑 | ≥80%(30-60μm) |
菌落總數 | ≤100 CFU/ml |
內毒素等級 | ≤10.0 EU/ml |
不溶物 | ≤0.2%（干膠） |
異物（colored） | ≤6 顆粒 |
出貨溶劑：含0.2mol/L醋酸鈉的20%乙醇溶液
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三、TOYOPEARL Sulfate-650F適用樣品
??單克隆抗體
??血漿蛋白、凝血因子
??病毒、VLP、疫苗
??重組蛋白
??堿性蛋白
四、TOYOPEARL Sulfate-650F的主要特點(diǎn)
??高載量
??多聚體分離
??耐鹽的陽(yáng)離子交換填料
??與肝素親和作用相似（硫酸根官能團）
五、TOYOPEARL Sulfate-650F的應用條件
1. 單克隆抗體多聚體的分離純化
??對IgG可達到100 g/L的高載量。
??可以作為Protein A親和層析的后續純化步驟。
2. 在pH?5?以下具有耐鹽性
??在pH 4.7、0.15 mol/L NaCl的緩沖液中可以對樣品進(jìn)行吸附。
??在Protein A 親和層析或前處理后可以直接進(jìn)行上樣。
3. 硫酸根官能團的特異性相互作用
??與肝素親和層析相似，可以與凝血因子、疫苗或病毒結合。
??可以用0-1 mol/L的NaCl進(jìn)行鹽梯度洗脫。
??與競爭對手的Sulfate填料具有類(lèi)似的吸附性能，但是Sulfate-650F具有更高的吸附載量（某些填料由于孔徑小，所以蛋白只能結合在填料的表面）。
4. 常用的分離條件
??上樣緩沖液的pH要控制在5.5以下。
??優(yōu)化緩沖液的pH和鹽濃度能夠獲得更好的分離效果。
??當緩沖液的pH為4.2時(shí)，即使在0.3mol/LNaCl的緩沖液中也能夠獲得很高的吸附載量。
六、凝血因子IX的純化實(shí)例
下圖是使用耐鹽型陽(yáng)離子交換填料TOYOPEARL Sulfate-650F分離PCC中的維生素K依賴(lài)性凝血因子的結果。
首先，使用含有0.4 mol/L NaCl的高鹽濃度洗脫液，讓吸附較弱的凝血因子II、因子VII、因子X不被填料吸附直接流穿。然后，通過(guò)降低鹽濃度和提升pH的階梯梯度洗脫，把吸附在柱子上的因子IX洗脫下來(lái)。使用Sulfate-650F無(wú)需對樣品進(jìn)行脫鹽處理，即可獲得與使用肝素親和層析相同純度的因子IX。
七、TOYOPEARL Sulfate-650F在類(lèi)似于肝素親和填料方面的應用展望
1. 類(lèi)似于肝素親和填料的分離純化作用*
??凝血因子：Factor VII、Factor IX、Factor X、凝血酶、AT-III
??組織纖溶酶原激活物(TPA）
??脂肪酶、核酸酶有關(guān)（如限制性?xún)惹忻?/span>）、膠原酶、脂蛋白
2. 利用硫酸根官能團的相互作用*
??病毒、疫苗
八、訂貨信息
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貨號 | 描述 |
023468 | TOYOPEARL Sulfate-650F, 250ml |
023469 | TOYOPEARL Sulfate-650F, 1L |
023470 | TOYOPEARL Sulfate-650F, 5L |
023471 | TOYOPEARL Sulfate-650F, 50L |
45205 | SkillPak TOYOPEARL Sulfate-650F 1 ml×5 |
45241 | SkillPak TOYOPEARL Sulfate-650F?5ml×1 |
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