第六十一期 耐鹽型陰離子交換層析介質(zhì)TOYOPEARL NH2-750F

耐鹽型陰離子交換層析介質(zhì)TOYOPEARL NH₂-750F

細胞培養基由類(lèi)似于生理離子強度的0.1-0.15mol/L的NaCl構成。在這種離子強度條件下，樣品很難被離子交換填料吸附，所以樣品一般要通過(guò)脫鹽處理后才能上樣。如果有一種離子交換填料能夠在0.1 mol/L NaCl以上的鹽濃度條件下也可以吸附樣品的話(huà)，樣品將無(wú)需脫鹽直接上樣進(jìn)行分離，從而大幅簡(jiǎn)化操作和成本。

這樣的填料被稱(chēng)為“耐鹽型”離子交換填料，在某種意義上類(lèi)似于混合模式的填料。

混合模式填料的特點(diǎn)

1. 同時(shí)具有離子交換和疏水作用基團。

2. 在鹽濃度較高的緩沖液中仍能吸附蛋白——鹽耐性。

3. 陰離子型混合模式填料。一般情況下，疏水模式的結合占主導地位，但是TOYOPEARL NH₂-750F這款填料，陰離子交換模式的結合占主導地位。

4. 陽(yáng)離子型混合模式填料。離子交換模式的結合占主導地位，TOYOPEARL MX-Trp-650M混合模式填料具有很高的吸附載量。

產(chǎn)品規格參數

?

層析柱：6mmI.D.×40mm

緩沖液：0.02mol/L Bis-Tris-HCl（pH 6.0）+0.15mol/L NaCl

樣品：BSA（2g/L），

柱留時(shí)間：1min

產(chǎn)品應用

1.? 耐鹽型的純化分離（單克隆抗體、其他）

n? NaCl濃度超過(guò)0.15 mol/L的緩沖液中，仍然可以吸附蛋白樣品。

n? 樣品原液可以直接上樣，無(wú)需稀釋。

n? 通過(guò)穿透法或者梯度洗脫法去除多聚體。

n? 匹配IgG和生物大分子樣品的大孔徑層析介質(zhì)。

2. ?層析條件

n? 緩沖液的pH值要低于目標蛋白的pI（等電點(diǎn)）。

n? 緩沖液中加入鹽可能會(huì )增加吸附載量。

n? 上樣緩沖液的pH值越高，緩沖液的最高鹽濃度可達0.3 mol/L。

n? 不同于普通陰離子交換填料的吸附力和選擇性。

混合模式填料和傳統的高載量離子交換填料的區別

1. 傳統的高載量離子交換填料TOYOPEARL GigaCap系列，在低鹽濃度下, TOYOPEARL GigaCap系列具有非常高的吸附載量。

傳統的離子交換填料，粒徑越小，分辨率越高（Superfine級：35μm。TOYOPEARL GigaCapS-650S, GigaCapQ-650S，TOYOPEARL DEAE-650S, SuperQ-650S, SP-650S, CM-650S）

2. 混合模式填料需要優(yōu)化分離條件。上樣和洗脫緩沖液需要對溶液中的鹽濃度和pH值進(jìn)行優(yōu)化。在0.1~0.3 mol/L NaCl溶液中能夠吸附蛋白是比較理想的條件。需要利用鹽和pH梯度進(jìn)行更有效的洗脫。相較于傳統的離子交換填料，清洗條件更為苛刻。優(yōu)化層析條件可以提供更好的分離選擇性以去除雜質(zhì)。

TOYOPEARL NH₂-750F

結論

1. TOYOPEARL NH₂-750F耐鹽型離子交換填料，在0.15 mol/L NaCl甚至更高的鹽濃度下都表現出了相當高的吸附載量。

2. 酸性蛋白在低于等電點(diǎn)的酸性條件下依然能被吸附。

3. 這款填料可以使用線(xiàn)性梯度或者穿透模式來(lái)去除抗體中的多聚體。

4. 在0.5 mol/L NaOH下穩定。

5. 避免使用多價(jià)陰離子或低鹽濃度的緩沖液上樣。

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