多肽的分離純化工藝舉例（2-3步）
常用工藝
一、尺寸排阻色譜
* 利用色譜填料的細孔徑、基于分析物尺寸大小達成分離的模式
* 優(yōu)勢
1.?色譜條件單純，利于品質(zhì)管理的使用
2.?根據分子量（尺寸）大小可以預判洗脫位置
* 缺點(diǎn)
1.?樣品可進(jìn)樣量相對較小
2.?分析物可能會(huì )與固定相（色譜填料）發(fā)生疏水相互作用
* 流動(dòng)相推薦
1.?流動(dòng)相：0.1 % TFA＋ 45% 乙腈（0.1 % TFA非必須）
2.?同種流動(dòng)相，含有蛋白組分時(shí)蛋白的空間構造被破壞，分子呈伸展狀態(tài)（變性），
這時(shí)候進(jìn)行分子量表征時(shí)，使用100 %水溶液條件下標準蛋白校正曲線(xiàn)不合適
3.?含0.1 % TFA的流動(dòng)相分析疏水性高的多肽時(shí)，如果洗脫較遲，可以推薦使用醋酸溶液等
二、反相色譜
* 基于分析組分在兩相間的分配差異而達成分離的模式
* 優(yōu)勢
1.?分辨率非常高
2.?適合聯(lián)用MS檢測
3.?精制純化時(shí)，使用揮發(fā)性的鹽可省時(shí)省力
4.?選擇性、保留的差異豐富→ C18, C8, C4, CN, Phenyl, 碳含量?導入方式、細孔徑、粒徑
* 缺點(diǎn)
1.?樣品處理量相對較小
2.?使用有機溶劑
3.?樣品的保留、平衡、重復性→ 低（無(wú)）有機溶劑濃度或使用離子對試劑時(shí)，需進(jìn)行充分的平衡
* 流動(dòng)相推薦
有機溶劑（乙腈、甲醇）不同，分離選擇性不同（40 %的乙腈與60 %的甲醇，保留能力基本相同）
杜邦樹(shù)脂在多肽純化中的應用
二、離子交換色譜
* 利用靜電相互作用程度差異達成分析組分分離的模式
* 優(yōu)勢
1.?分辨率高
2.?樣品處理量大（載量高，尤其適合純化制備）
* 缺點(diǎn)
1.?由于使用鹽進(jìn)行洗脫，不適合MS聯(lián)用檢測
2.?分析物可能會(huì )與固定相（色譜填料）發(fā)生疏水相互作用
* 流動(dòng)相推薦
1.?流動(dòng)相：含有機溶劑的鹽緩沖液，利用鹽或pH的梯度洗脫
2.?陽(yáng)離子交換色譜一般使用酸性溶液體系；陰離子交換色譜一般使用中性或弱堿性溶液體系
3.?對于疏水性高的多肽，要注意可能會(huì )發(fā)生洗脫相對遲緩的現象
東曹離子交換填料在胰島素純化中的應用
已做案例----抗菌肽
